DH5α感受态细胞(DH5α Competent Cell)

DH5α感受态细胞 是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA 的热击转化。DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株,其φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。

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DH5α Competent Cell 产品信息:

 

产品描述(Description)

 

DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA 的热击转化。DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株,其φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。使用pUC19质粒检测,转化效率可达10e8,适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

 

 

操作步骤(Operation Steps)

 

1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。

2、待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。

3、42℃热击90秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。

4、向每个离心管中加入600~800μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。

5、根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。

 

注意:

1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200~300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2、新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

 

注意事项(Matters Needing Attention)

 

1、感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。

2、转化所有步骤均在无菌条件下操作。

3、包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA,供对照试验使用。

 

 

保存温度(Storage Temperature)

 

-80℃

 

 

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