ActSep®CD3/CD28分选激活磁珠（ActSep^®CD3/CD28Separation & Activation Magnetic Beads)

产品货号：GMP-TL603

♦产品描述（Description）

ActSep^® CD3/CD28单抗偶联分选激活磁珠可用于分选人 CD3⁺T 细胞，并提供了一种不需要抗原 呈递细胞或抗原就能激活和扩增 T 细胞的简单方法。通过在磁珠上偶联抗 CD3 和抗 CD28 单克隆抗体，提供 T 细胞激活和扩增需要的初级和协同刺激信号，实现 T 细胞的分选、激活和扩增。此 款磁珠适用于人 T 细胞，CAR-T 等多种 T 细胞培养技术的应用。

♦ 产品特点（Advantages）

1、 分选、激活于一体，省时高效

2、4.5μm超顺磁珠，与细胞大小匹配

3、方便分离，易操作

4、高稳定性、高安全性

5、产品符合ISO9001和ISO13485质控要求

♦ 反应种属（Reaction Species）

人

♦ 浓度（Concentration）

2×10⁸beads/mL

♦内毒素（Endotoxin）

<0.5EU/mL

♦ 含量（Content）

1mL

♦ 性状（Character）

棕色悬浊液体

♦ 储存条件（Storage conditions）

2~8℃

♦ 有效期（Validity period）

24个月

♦ 使用方法（Usage method）

1. PBMC 细胞处理：

  1.1 将人的PBMC细胞重悬于含1% HSA的PBS缓冲液中，取样计数并标记CD3进行流式检测。

  1.2 根据PBMC细胞CD3阳性率用含1% HSA的PBS缓冲液调节CD3 ⁺T细胞密度至1×10⁷个/mL。

2. ActSep^® CD3/CD28分选激活磁珠的清洗： 

  2.1 重悬磁珠（涡旋不低于30s，或者颠倒混匀5 min）。 

  2.2 按照磁珠数和CD3⁺T细胞孵育比例（推荐比例范围为1:1 ~ 3:1。在此推荐范围内，随着磁珠量的增加，CD3⁺T细胞分选效率会随之提升。在实际应用中，客户可根据实际情况摸索调整），取出所需磁珠量，转移到离心管中。

  2.3 向上述离心管中加入l mL 含1% HSA的PBS缓冲液，将磁珠进行重悬，吹打或涡旋进行润洗。 

  2.4 将上述装有重悬磁珠的离心管放在磁力架（磁珠专用）上，静置 1 min，弃去上清，注意不要吸取到磁珠。

3. 磁珠分选和激活CD3⁺T 细胞： 

  3.1 向上述洗涤后的磁珠中按比例加入调整好 CD3⁺T 细胞密度的 PBMC，混合均匀。

  3.2 将上述离心管置于转速 15~20 rpm 的混样仪上，室温孵育 30 min。 

  3.3 将上述离心管放在磁力架（磁珠专用）上，静置 1min，收集上清并进行计数和流式检测， 标记CD3。 

  3.4 用含200 IU/mL rh IL-2（同立海源, Cat: GMP-TL777）的完全培养基（客户可根据自身实际 实验条件进行调整，根据实验需求明确是否使用自体血浆）重悬磁珠和细胞的混合物，并调整细 胞密度为0.5~1×10⁶个/mL。

  3.5 将上述细胞悬液置于细胞培养容器中，于 37℃，5% CO₂培养箱中培养 48h，取样去除磁珠 后计数并测试激活效率（CD69⁺CD25⁺百分比）。 

4. 细胞的扩增和培养：

观察细胞状态并定期补液，调整细胞密度至 0.5~1×10⁶个/mL（根据需要进行流式检测）。将细胞 培养至适宜时长（一般 12~14 天）后即可收获细胞。

♦ 实验数据（Experimental Data）

1、CD3⁺ T细胞分选

磁珠：CD3⁺ T细胞 = 3:1

2、CD3⁺T细胞激活

Donor1：磁珠与CD3⁺T细胞 在3:1条件下，孵育时间48小时效果

Donor2：磁珠与CD3⁺T细胞 在3:1条件下，孵育时间48小时效果

3、CD3⁺T细胞扩增

用ActSep^®CD3/CD28单抗偶联分选激活磁珠刺激纯化的CD3⁺T细胞，在补充有200IU/mL rhIL-2的T细胞培养基中细胞增殖和细胞活率效果。

4、T细胞耗竭

活化的CD3⁺T细胞上PD-1的表达，  ActSep®CD3/CD28单抗偶联分选激活磁珠和CD3⁺T细胞以 3:1 的比例刺激孵育，在第8天时PD-1的表达几乎恢复至正常水平。

♦ 参考文献

1. David M Barrett, Nathan Singh, Xiaojun Liu, Shuguang Jiang, Carl H June, Stephan A Grupp, Yangbing Zhao (2014). Relation of clinical culture method to T-cell memory status and efficacy in xeno graft models of adoptive immunotherapy. Cytotherapy. 16(5):619-30. 

2. Barbara Tumaini, Daniel W Lee, Tasha Lin, Luciano Castiello, David F Stroncek, Crystal Mackall, Alan Wayne,Marianna Sabatino. (2013). Simplified process for the production of anti-CD19-CAR-engineered T cells. Cytotherapy 15:1406-1415.

♦ 注意事项

1. 细胞扩增后需定期轻轻吹打培养容器中的细胞悬液，以便充分分散磁珠和细胞。 

2. 培养过程中，可以每 2~3 天进行细胞计数，细胞计数前均需去除磁珠，去除磁珠过程：将细胞 培养器中的细胞混悬均匀后取样至离心管中，将其放在磁力架（磁珠专用）上，静置 1 min，取上 清至新的离心管。 

3. 当细胞密度>1×10 ⁶个/mL 时，补加含200 IU/mL rH IL-2 的细胞完全培养基（同3.4），调整细 胞密度至 0.5~1×10 ⁶个/mL。 

4. 细胞培养至适宜天数后，需去除磁珠后收获细胞。 

5. 细胞培养过程中通过流式细胞术对 T 细胞的纯度、表型、活化状态进行检测。

 For research and manufacturing use.