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ActSep® CD3/CD28分选激活磁珠

ActSep ®CD3/CD28分选激活磁珠适用于人T细胞,CAR-T等多种T细胞培养技术的应用...

1mL/¥3680 5mL/询价
咨询电话 400-010-5556

产品货号:GMP-TL603

ActSep®CD3/CD28分选激活磁珠ActSep®CD3/CD28Separation & Activation Magnetic Beads)

 

产品货号:1mL / GMP-TL603-1000 

                          5mL / GMP-TL603-5000


 

♦预期用途

 

ActSep® CD3/CD28 分选激活磁珠可用于分选人 CD3 +T 细胞,并提供了一种不需要抗原呈递细胞或 抗原就能激活和扩增 T 细胞的简单方法。通过在磁珠上偶联抗 CD3 和抗 CD28 单克隆抗体,提供 T 细胞激活和扩增需要的初级和协同刺激信号,实现 T 细胞的分选、激活和扩增。此款磁珠适用于 人 T 细胞、CAR-T 等多种 T 细胞培养技术的应用。适用于生产细胞治疗产品。

 



 产品特点


1、 分选、激活于一体,省时高效

2、4.5μm超顺磁珠,与细胞大小匹配

3、方便分离,易操作

4、高稳定性、高安全性

5、产品符合ISO9001和ISO13485质控要求

 



♦ 反应种属

 

 



 浓度

 

2×108beads/mL




内毒素


<0.5EU/mL




 含量

 

1mL




 性状


棕色悬浊液体

 



♦ 储存条件

 

2~8℃

 



♦ 有效期

 

24个月




 使用方法


1. PBMC 细胞处理:

  1.1 将人的PBMC细胞重悬于含1% HSA的PBS缓冲液中,取样计数并标记CD3进行流式检测。

  1.2 根据PBMC细胞CD3阳性率用含1% HSAPBS缓冲液调节CD3 +T细胞密度至1×107/mL


2. ActSep® CD3/CD28分选激活磁珠的清洗: 

  2.1 重悬磁珠(涡旋不低于30s,或者颠倒混匀5 min)。 

  2.2 按照磁珠数和CD3 +T细胞孵育比例,取出所需磁珠量,转移到离心管中。(推荐使用比例为 1:1,可根据实际工艺在1:1-3:1的范围内进行调整,随着磁珠量的增加,CD3 +T细胞分选效率会随 之提升,细胞的激活及扩增效果也会有所差异。)

  2.3 向上述离心管中加入l mL 1% HSAPBS缓冲液,将磁珠进行重悬,吹打或涡旋进行润洗。 

  2.4 将上述装有重悬磁珠的离心管放在磁力架(磁珠专用)上,静置 1 min,弃去上清,注意不要吸取到磁珠。


3. 磁珠分选和激活CD3+T 细胞: 

  3.1 向上述洗涤后的磁珠中按比例加入调整好 CD3+T 细胞密度的 PBMC,混合均匀。

  3.2 将上述离心管置于转速 15~20 rpm 的混样仪上,室温孵育 30 min。 

  3.3 将上述离心管放在磁力架(磁珠专用)上,静置 1min 后,弃上清。(或可收集上清并进行 计数和流式检测,标记 CD3,用以评估分选效率。) 

  3.4 用含200 IU/mL rh IL-2(同立海源, Cat: GMP-TL777)的完全培养基(客户可根据自身实际 实验条件进行调整,根据实验需求明确是否使用自体血浆)重悬磁珠和细胞的混合物,并调整细 胞密度为0.5~1×106/mL 


4. 细胞的扩增和培养:

观察细胞状态并定期补液,调整细胞密度至 0.5~1×106/mL(根据需要进行流式检测)。将细胞 培养至适宜时长(一般 12~14 天)后即可收获细胞。




 实验数据


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 参考文献

 

1. David M Barrett, Nathan Singh, Xiaojun Liu, Shuguang Jiang, Carl H June, Stephan A Grupp, Yangbing Zhao (2014). Relation of clinical culture method to T-cell memory status and efficacy in xeno graft models of adoptive immunotherapy. Cytotherapy. 16(5):619-30. 

2. Barbara Tumaini, Daniel W Lee, Tasha Lin, Luciano Castiello, David F Stroncek, Crystal Mackall, Alan Wayne,Marianna Sabatino. (2013). Simplified process for the production of anti-CD19-CAR-engineered T cells. Cytotherapy 15:1406-1415.

 



 注意事项

1. 细胞扩增后需定期轻轻吹打培养容器中的细胞悬液,以便充分分散磁珠和细胞。 

2. 培养过程中,可以每 2~3 天进行细胞计数,细胞计数前均需去除磁珠,去除磁珠过程:将细胞 培养器中的细胞混悬均匀后取样至离心管中,将其放在磁力架(磁珠专用)上,静置 1 min,取上 清至新的离心管。 

3. 细胞培养至适宜天数后,需去除磁珠后收获细胞。 

4. 细胞培养过程中通过流式细胞术对 T 细胞的纯度、表型、活化状态进行检测。(如,可在细胞 磁珠混悬液培养 48h 后取样去除磁珠,计数并测试 T 细胞膜上 CD69 +CD25 +的表达变化,以评估激 活效率。)

 



 For research and manufacturing use.

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